Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD)

การผลิตและลักษณะสมบัติของโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อโพรเจสเทอโรน

Other Title (Parallel Title in Other Language of ETD)

Production and characterzation of monoclonal antibodies against progesterone

Year (A.D.)

2005

Document Type

Thesis

First Advisor

กิตตินันท์ โกมลภิส

Second Advisor

ธนาภัทร ปาลกะ

Faculty/College

Faculty of Science (คณะวิทยาศาสตร์)

Degree Name

วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Degree Level

ปริญญาโท

Degree Discipline

เทคโนโลยีชีวภาพ

DOI

10.58837/CHULA.THE.2005.916

Abstract

โพรเจสเทอโรนเป็นฮอร์โมนในกลุ่มสเตอรอยด์ มีน้ำหนักโมเลกุล 314 ดาลตัน ฮอร์โมนนี้ถูกสร้างและหลั่งออกมาสู่น้ำนมและกระแสเลือด ในวงรอบการเป็นสัดและในขณะตั้งท้องของโคนม โดยระดับโพรเจสเทอโรนจะสูงสุดประมาณวันที่ 21 และ 22 ของการตั้งครรภ์ ดังนั้นในการหาระยะเวลาเป็นสัดของโคนมเพื่อกำหนดวันผสมพันธุ์ที่ถูกต้อง และการตรวจสอบการตั้งครรภ์สามารถทำได้โดยการวัดระดับโพรเจสเทอโรน ในการวิจัยนี้จึงมีวัตถุประสงค์เพื่อผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อโพรเจสเทอโรน สำหรับนำไปผลิตเป็นชุดตรวจหาปริมาณโพรเจสเทอโรน ในการเตรียมเซลล์ไฮบริโดมาที่ผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อโพรเจสเทอโรนนั้น ได้หลอมรวมเซลล์ทั้งหมด 4 ครั้ง ได้เซลล์ไฮบริโดมาที่ผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อโพรเจสเทอโรน จำนวน 12 โคลน คือโคลนรหัส 2/A3-F1, 3/F7-F1, 1/10B10-F4, 2/A3-F4, 3/C9-F4, 3/D7-F4, 3/E4-F4, 3/F7-F4, 4/E11-F4, 5/G7/F4, 5/H2-F4 และ 5/H8-F4 จากการศึกษาสมบัติของโมโนโคลนอลแอนติบดี พบว่าโมโนโคลนอลแอนติบอดีรหัส 2/A3-F4, 3/C9-F4, 3/F7-F4, 4/E11-F4 และ 5/H8-F4 มีไอโซไทป์เป็น lgG1 รหัส 3/D7-F4 และ 5/G7/F4 มีไอโซไทป์เป็น lgG2a รหัส 2/A3-F1, 3/F7-F1 และ 1/10B10-F4 มีไอโซไทป์เป็น lgG3 หรัส 3/E4-F4 และ 5/H2-F4 มี ไอโซไทป์เป็น lgG2b และ lgM ตามลำดับ เมื่อทดสอบความจำเพาะในการจับกับโพรเจสเทอโรนในรูปอิสระ พบว่าโมโนโคลนอลแอนติบอดีรหัส 2/A3-F1 และ 3/F7-F1 ไม่มีความจำเพาะกับโพรเจสเทอโรนในรูปอิสระ ส่วนโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่เหลืออื่นๆ อีก 10 โคลน มีความจำเพาะกับโรเจสเทอโรนในรูปอิสระ โดยมีค่า IC50 อยู่ในช่วง 2-361 นาโนกรัมต่อมิลลิตร และมีค่า LOD อยู่ในช่วง 0.03-80 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร เมื่อนำโมโนโคลนอลแอนติบอดีเหล่านี้ ไปทดสอบการทำปฏิกิริยาข้ามกับสารในกลุ่มฮอร์โมนสเตอรอยด์ พบว่าโมโนโคลน 3/D7-F4, 3/E4-F4 ทำปฏิกิริยาข้ามกับสารในและนอกกลุ่มฮอร์โมนสเตอรอยด์ต่ำกว่า 0.01%

Other Abstract (Other language abstract of ETD)

Progesterone is a steroid hormone with a molecular weight of 314 daltons and is secreted in milk and blood during estrus and pregnancy in cattle. The progesterone level reaches its peak on the 21st and 22nd day of pregnancy. Therefore, the level of progesterone is routinely used to predict the date of fertilization and pregnancy. The purpose of this research is to produce monoclonal antibodies against progesterone for test kit development. To produce hybridoma cells which can secrete monoclonal antibodies specific for progesterone, four somatic fusions were carried out, yielding twelve monoclones named 2/A3-F1, 3/F7-F1, 1/10B10-F4, 2/A3-F4, 3/C9-F4, 3/D7-F4, 3/E4-F4, 3/F7-F4, 4/E11-F4, 5/G7/F4, 5/H2-F4 and 5/H8-F4. The properties of all monoclonal antibodies were characterized. The isotypes of each monoclonal antibodies were determined as follows; 2/A3-F4, 3/C9-F4, 3/F7-F4, 4/E11-F4 and 5/H8-F4 are lgG1, 3/D7-F4 an d 5/G7/F4 are lgG2a, 3/F7-F1 and 1/10B10-F4 are lgG3; 3/E4-F4 and 5/H2-F4 is lgG2b and lgM respectively. The two antibodies, 2/A3-F1 and 3/F7-F1, are nonspecific for progesterone in a free form, but the rest of antibodies are specific for progesterone in a free from with the IC50 value in the range of 2-361 ng/ml and the LOD value in the range of 0.03-80 ng/ml. The cross reactivity of 3/D7-F4 and 3/E4-F4 with other steroid hormones and antibiotics is less than 0/01%.

Link to Full Text

Share

COinS