Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD)

การตรวจหาเชื้อเอนเทอโรท็อกซิเจนิก เอสเชอริเชีย โคไล ในตัวอย่างอาหารด้วยเทคนิคปฏิกริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส

Other Title (Parallel Title in Other Language of ETD)

Detection of Enterotoxigenic Escherichia Coli in food samples by polymerase chain reaction technique

Year (A.D.)

2012

Document Type

Thesis

First Advisor

สุญาณี พงษ์ธนานิกร

Second Advisor

มณีวรรณ สุขสมทิพย์

Faculty/College

Faculty of Pharmaceutical Sciences (คณะเภสัชศาสตร์)

Degree Name

เภสัชศาสตรมหาบัณฑิต

Degree Level

ปริญญาโท

Degree Discipline

อาหารเคมีและโภชนศาสตร์ทางการแพทย์

DOI

10.58837/CHULA.THE.2012.660

Abstract

งานวิจัยนี้ได้ทำการพัฒนาวิธีการเตรียมตัวอย่างอาหารให้เหมาะสมก่อนนำไปทำปฏิกิริยา PCR รวมถึงพัฒนาหาสภาวะที่เหมาะสมในการทำปฏิกิริยา multiplex PCR ในการตรวจหาการปนเปื้อนของเชื้อเอนเทอโรท็อกซิเจนิก เอสเชอริเชีย โคไล (enterotoxigenic Escherichia coli; ETEC) ในตัวอย่างอาหาร โดยวิธีการเตรียมตัวอย่างที่เลือกใช้ในงานวิจัยนี้เพื่อแยกแบคทีเรียออกจากเมทริกซ์ของอาหารหรือตัวยับยั้งปฏิกิริยา PCR และเพื่อเพิ่มความเข้มข้นของเชื้อแบคทีเรีย คือ วิธีการกักเซลล์แบคทีเรียไว้บนแผ่น membrane filter ผลการศึกษาพบว่า แม้ประสิทธิภาพในการแยกเซลล์แบคทีเรียออกจากเมทริกซ์ของอาหารของ membrane filter ซึ่งประเมินจากค่า % recovery จะมีค่าไม่สูงมาก คือ อยู่ในช่วง 69-79 แต่เมื่อนำมาใช้ร่วมกับวิธี multiplex PCR ที่พัฒนาขึ้นสามารถตรวจพบการปนเปื้อนของ ETEC ได้แม้มีการปนเปื้อนเพียง 102 CFU ต่ออาหารหนึ่งกรัม และสามารถดำเนินการแล้วเสร็จภายใน 8-10 ชั่วโมง หลังจากที่นำเอาวิธีการเตรียมตัวอย่างอาหารโดยใช้ membrane filter มาใช้ร่วมกับ multiplex PCR ในการตรวจหาการปนเปื้อนของเชื้อ ETEC ในตัวอย่างอาหารตามท้องตลาด ได้แก่ พริกแกงเขียวหวาน เนื้อหมูดิบ ลาบหมูสุก ลาบหมูกึ่งดิบกึ่งสุก และเครื่องดื่ม ผลการทดลองพบว่าสามารถตรวจพบเชื้อ E. coli ปนเปื้อนในอาหารประเภท เนื้อหมูดิบ ลาบหมูสุก ลาบหมูกึ่งดิบกึ่งสุก น้ำมะพร้าว น้ำฝรั่ง และน้ำใบบัวบก และพบเชื้อ ETEC ในอาหารประเภทลาบหมูกึ่งดิบกึ่งสุก แสดงให้เห็นว่าวิธีที่พัฒนาขึ้นสามารถตรวจการปนเปื้อนของเชื้อ ETEC ในอาหารได้

Other Abstract (Other language abstract of ETD)

The aim of this study was to develop sample preparation and optimize PCR conditions which allowed the rapid and sensitive detection of enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) contamination in food. Trapping bacterial cells with membrane filter was selected for sample preparation in this study. The result showed that although efficiency of bacteria separation from food matrix by this method evaluated by %recovery was not high (69-79), developed multiplex PCR had a satisfied sensitivity as it could detect 102 CFU of ETEC/gram of food. Moreover, it could be accomplished in 8-10 hours. When the developed method was used to detect ETEC contamination in food including green curry paste, raw pork, cooked ground pork with vegetable and chili (larb), medium ground pork with vegetable and chili, and beverages, there was E. coli contamination in raw pork, cooked ground pork with vegetable and chili, medium ground pork with vegetables and chili, coconut juice, guava juice, and Centella asiatica juice. There was ETEC contamination in medium ground pork with vegetable and chili. The present study indicated that developed PCR method could detect ETEC contamination in food.

Link to Full Text

Share

COinS