Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD)
การสร้างมิวแทนท์ของ Azotobacter spp ที่ไนโตรจิเนสไม่ถูกกดดัน
Other Title (Parallel Title in Other Language of ETD)
Construction of nitrogenase derepressed mutants of Azptobacter spp.
Year (A.D.)
1987
Document Type
Thesis
First Advisor
ไพเราะ ทิพยทัศน์
Faculty/College
Graduate School (บัณฑิตวิทยาลัย)
Degree Name
วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต
Degree Level
ปริญญาโท
Degree Discipline
ชีวเคมี
DOI
10.58837/CHULA.THE.1987.601
Abstract
การวิจัยนี้ได้เคลื่อนพลาสมิดดีเอนเอ pCK3 ซึ่งมียีน nif A จาก Klebsiella pneumoniae M5al มีคุณสมบัติถอดรหัสได้ตลอดเวลาเข้าไปใน Azotobacter โดยใช้ วิธีทรานสฟอร์เมชั่น พบว่าสามารถแยกทรานสฟอร์แมนท์ของ A. vinelandii และ A. chroococcum ที่ถอดรหัสไนโตรจิเนสภายใต้ภาวะที่มีอนุมูลอัมโมเนียมปริมาณสูงได้ ด้วยความถี่ 1.2 X 109 และ 2 X 107 เซลล์ต่อกรัมของพลาสมิดดีเอนเอ ตามลำดับ ซึ่งทรานสฟอร์แมนท์เหล่านี้มีสมบัติการเจริญเติบโตคล้ายคลึงกันมาก มีความสามารถต้านยาเตรทตราซัยคลิน 5 µg.ml -1 และคานามัยซิน 50 µg.ml-1 ได้ดี และถอดรหัสให้เอนไซม์ไนโตรจิเนสภายใต้ภาวะที่มีอนุมูลอัมโมเนียมได้ค่า ARA ใกล้เคียงกันแม้ว่าจะค่อนข้างต่ำคือ มีค่าเพียง 30 - 60 นาโนโมลของเอทีลีนต่อมิลลิกรัมโปรตีนต่อชั่วโมง จึงได้กลายพันธุ์ทรานสฟอร์แมนท์ที่มีพลาสมิด pCK3 ด้วย NTG และได้พลาสมิดตัวใหม่ให้ชื่อว่า pCK3* นำไปทรานสฟอร์มเข้า Azotobacter spp. สายพันธุ์ WT อีกครั้งหนึ่ง ในครั้งนี้สามารถแยกได้ทรานสฟอร์แมนท์ที่ต้านคานามัยซิน 1 µg. ml-1 หรือเพิ่มเป็น 20 เท่าจากเดิม นอกจากนี้ยังพบว่าทรานสฟอร์แมนท์ชุดใหม่มีค่า ARA เพิ่มจากทรานสฟอร์แมนท์เดิม 13 เท่า ในภาวะที่มี Ammonium acetate 15 mM เป็นสารต้นตอไนโตรเจน ได้สุ่มเลือกสายพันธุ์ของทรานสฟอร์แมนท์จากการทรานสฟอร์เมชั่นทั้งสองครั้งนำไปศึกษาผลกระทบต่ออ้อย พบว่าน้ำหนักแห้งของต้นและใบอ้อยจากอ้อยที่ปลูกร่วมกับ Azotobacter WT และทรานสฟอร์แมนท์มีค่าสูงกว่า control ที่ไม่มี Azotobacter เมื่อปลูกอ้อยในสารอาหารที่มี Ammonium sulfate 1.2 mM สายพันธุ์ pCK3 จะช่วยเพิ่มน้ำหนักแห้งของต้นและใบอ้อยเป็น 153% และเพิ่มค่า ARA จากรากอ้อยเป็น 233% เมื่อเทียบกับสายพันธุ์ WT ยิ่งไปกว่านั้นสายพันธุ์ที่มี pCK3* จะช่วยเพิ่มน้ำหนักแห้งของลำต้นและใบอ้อยเป็น 157% และเพิ่มค่า ARA จากรากอ้อยเป็น 472% เมื่อเทียบกับสายพันธุ์ที่มี pCK3* ผลของการวิจัยนี้แสดงให้เห็นว่าพลาสมิดตัวใหม่ pCK3* มีประสิทธิภาพในการถอดรหัสของยีน nif A สูงกว่าเดิม
Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-No Derivative Works 4.0 International License.
Recommended Citation
ภคอัครเลิศกุล, เสาวคนธ์, "การสร้างมิวแทนท์ของ Azotobacter spp ที่ไนโตรจิเนสไม่ถูกกดดัน" (1987). Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD). 46431.
https://digital.car.chula.ac.th/chulaetd/46431