Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD)

การผลิตและลักษณะสมบัติของโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อแร็กโทพามีน

Other Title (Parallel Title in Other Language of ETD)

Production and characterization of monoclonal antibodies against ractopamine

Year (A.D.)

2008

Document Type

Thesis

First Advisor

กิตตินันท์ โกมลภิส

Second Advisor

นันทิกา คงเจริญพร

Faculty/College

Faculty of Science (คณะวิทยาศาสตร์)

Degree Name

วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Degree Level

ปริญญาโท

Degree Discipline

เทคโนโลยีชีวภาพ

DOI

10.58837/CHULA.THE.2008.931

Abstract

แร็กโทพามีนเป็นสารเคมีที่อยู่ในกลุ่มเบต้าอะโกนิสต์และถูกยอมรับเป็นสารผสมอาหารสำหรับสุกรและโคกระบือโดยสำนักงานคณะกรรมการอาหารและยาสหรัฐอเมริกา เพื่อกระตุ้นการเติบโตของสัตว์เลี้ยงเพื่อใช้เนื้อในการบริโภค เนื่องจากสารนี้มีผลทำให้ลดการสังเคราะห์ไขมันและเพิ่มการสังเคราะห์โปรตีน อย่างไรก็ตาม มีรายงานการวิจัยหลายฉบับได้กล่าวถึงการตกค้างของสารเบต้าอะโกนิสต์ในผลิตภัณฑ์สัตว์ซึ่งส่งผลเสียต่อมนุษย์ได้ ดังนั้นการใช้แร็กโทพามีนจึงถูกห้ามใช้ในสหภาพยุโรปและเอเชีย งานวิจัยนี้จึงมุ่งในการผลิตและศึกษาลักษณะสมบัติของโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อแร็กโทพามีนเพื่อนำไปใช้พัฒนาชุดตรวจด้วยวิธี ELISA โดยทำการเชื่อมแร็กโทพามีนกับโปรตีนอัลบูมินจากซีรัมของโคสำหรับใช้เป็นแอนติเจนที่ใช้กระตุ้นภูมิคุ้มกันของหนูทดลองสายพันธุ์ BALB/c จำนวน 3 ตัว ซีรัมจากหนูทั้งสามตัวให้ค่าระดับแอนติบอดีสูง ซึ่งอยู่ระหว่าง 1:64000 ถึง 1:512000 ในการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อแร็กโทพามีน ทำการหลอมรวมเซลล์ม้ามของหนูทดลองกับเซลล์ไมอีโลมาได้ผลผลิตเป็นเซลล์ไฮบริโดมาที่ผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อแร็กโทพามีนจำนวน 5 โคลนคือ 10A4, 4B12, 10G3, 2H3 และ 3A6 จากการศึกษาลักษณะสมบัติของโมโนโคลนอลแอนติบอดีพบว่า มีไอโซไทป์เป็น IgG1 มีความไวซึ่งคำนวณอยู่ในรูปค่าความเข้มข้นของสารที่น้อยที่สุดที่สามารถตรวจวัดได้ มีค่าเท่ากับ 0.44, 15.41, 19.85, 29.25 และ 92.19 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร (ppb) ตามลำดับ นอกจากนี้โมโนโคลนอลแอนติบอดีไม่เกิดปฏิกิริยาข้ามกลุ่มกับสารที่นำมาทดสอบ จากทั้ง 5 โคลนที่ได้โมโนโคลนอลแอนติบอดี 10A4 ให้ค่าความไวที่ดีที่สุด เมื่อหาค่า IC50 และค่าความเข้มข้นของสารที่น้อยที่สุดที่สามารถตรวจวัดได้ของโมโนโคลนอลแอนติบอดีหลังทำให้บริสุทธิ์จากโคลน 10A4 มีค่าเท่ากับ 1.85 และ 0.29 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร ตามลำดับ ดังนั้นโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ได้จากโคลน 10A4 มีศักยภาพเพียงพอที่จะนำไปพัฒนาเป็นชุดตรวจแบบจำเพาะสำหรับตรวจสารแร็กโทพามีนได้

Other Abstract (Other language abstract of ETD)

Ractopamine is a chemical substance in beta-agonist group and has been approved as a feed additive for swine and cattle by the U.S. FDA to promote growth of animals for meat production due to its effects in reducing fat deposition and enhancing protein synthesis. However, many research reported that beta-agonist residues in the animal products cause the adverse effects on human. Thus, the use of ractopamine has not been approved in the European Union (EU) and Asia. This research concentrated on the production and characterization of monoclonal antibodies against ractopamine for the development of ELISA test kit. Ractopamine was conjugated to bovine serum albumin for using as an antigen to immunize three BALB/c mice. Antisera from all mice gave high antiserum titers ranged from 1:64000 to 1:512000. To produce monoclonal antibodies against ractopamine, fusions of spleenocytes and myeloma cells were performed yielding five monoclones, 10A4, 2H3, 4B12, 3A6 and 10G3. Characterization of monoclonal antibodies showed that isotype of these clones was identified as IgG1. Their sensitivities calculated as limit of detection were 0.44, 15.41, 19.85, 29.25 and 92.19 ng/ml (ppb), respectively. In addition, these clones showed no cross-reactivity to all tested chemicals. Among the five clones obtained, monoclonal antibody 10A4 was the most sensitive clone. The IC50 value and limit of detection of the purified monoclonal antibody 10A4 were 1.85 and 0.29 ng/ml, respectively. Consequently, the obtained monoclonal antibody 10A4 could be used to develop a specific test for ractopamine detection.

Link to Full Text

Share

COinS