Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD)

การสร้างชัตเทิลเวกเตอร์และการศึกษาเบื้องต้นของยีนเดกซ์แทรนเนสจาก Arthrobacter sp. สายพันธุ์ AG-2 ที่แสดงออกใน Bacillus subtilis

Other Title (Parallel Title in Other Language of ETD)

Construction of shuttle vector and preliminary study of dextranase gene from Arthrobacter sp. stain AG-2 expressed in Bacillus subtilis

Year (A.D.)

2005

Document Type

Thesis

First Advisor

สุพัฒน์ เจริญพรวัฒนา

Second Advisor

สุเทพ ธนียวัน

Faculty/College

Faculty of Science (คณะวิทยาศาสตร์)

Degree Name

วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Degree Level

ปริญญาโท

Degree Discipline

จุลชีววิทยาทางอุตสาหกรรม

DOI

10.58837/CHULA.THE.2005.938

Abstract

pGEMTF เป็นชัตเทิลเวกเตอร์ขนาด 8 กิโลเบสที่สร้างขึ้นโดยการเชื่อมกันระหว่าง pGEM-7Zf(+) และ pTF6 ซึ่งเป็นพลาสมิดที่ถ่ายแบบใน Escherichia coli และ Bacillus sp. ตามลำดับ เพื่อใช้ศึกษาการแสดงออกของเดกซ์แทรนเนสจาก Arthrobacter sp. สายพันธุ์ AG-2 ใน Bacillus subtilis โดยใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสขยายส่วนที่ประมวลรหัสเดกซ์แทรนเนสจาก Arthrobacter sp. โดยออกแบบให้ปลายของไพรเมอร์ทั้งสองฝั่งมีจุดตัดเอนไซม์ Alw21I แล้วโคลนเข้าใน pGEM-7Zf(+) ตั้งชื่อพลาสมิดนี้ว่า pGEMDEX จากนั้นตัด pGEMDEX ด้วยเรสทริกชันเอนไซม์ Alw21I ได้ชิ้นดีเอ็นเอซึ่งมีส่วนประมวลรหัสเดกซ์แทรนเนส ขนาดประมาณ 2 กิโลเบส นำมาโคลนลงใน pGEMTF ที่ตัดด้วยเรสทริกชันเอนไซม์ PstI ซึ่งเป็นเอนไซม์ที่เป็นคู่สมกับ Alw21I โดยใช้ E.coli DH5 เป็นเซลล์เจ้าบ้าน พบว่าได้พลาสมิดขนาด 10 กิโลเบส ตั้งชื่อว่า pBUNDEX จากนั้นทรานสฟอร์ม pBUNDEX เข้าสู่ Bacillus subtilis 3 สายพันธุ์ คือ MI111, MI111 low protease และ MI113 ขนาดของพลาสมิดที่พบใน Bacillus subtilis ทั้งสามชนิดนั้นมีขนาดเล็กกว่า pBUNDEX และไม่สามารถตรวจพบส่วนประมวลรหัสเดกซ์แทรนเนสได้ด้วยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส ซึ่งแสดงให้เห็นว่ามีการตัดออกของยีนเกิดขึ้น

Other Abstract (Other language abstract of ETD)

pGEMTF (8 Kb), a shuttle vector that was constructed from pGEM+7Zf(+) and pTF6, capable of replicating in E.coli and Bacillus sp. was used as an expression vector for dextranase gene (dex) isolated from Arthrobacter sp. strain AG-2 in Bacillus subtilis. The dex amplified by BUN+F and BUN+R primers, with Alw21I restriction site at their 5’end, was cloned into pGEM-7Zf(+) and designated as pGEMDEX. The Alw21I fragment from pGEMDEX containing dex was cloned into PstI cut pGEMTF by using E. coli DH5as host. The 10 Kb product that contained dex was found and designated as pBUNDEX. Finally, pBUNDEX was transformed into 3 Bacillus subtilis strain;MI111, MI111 low protease and MI113 host. Plasmid size in these Bacillus subtilis strains was smaller than pBUNDEX in E.coli and dex could not be detected by PCR amplified. The result showed that constructed plasmid was deleted when transformed into Bacillus subtilis hosts.

Link to Full Text

Share

COinS