Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD)

Bioactive compounds from endophytic fungi isolated from Kaempferia parviflora

Other Title (Parallel Title in Other Language of ETD)

สารออกฤทธิ์ทางชีวภาพจากราเอนโดไฟต์ที่แยกจากกระชายดำ Kaempferia parviflora

Year (A.D.)

2004

Document Type

Thesis

First Advisor

Sophon Roengsumran

Second Advisor

Prakitsin Sihanonth

Faculty/College

Faculty of Science (คณะวิทยาศาสตร์)

Degree Name

Master of Science

Degree Level

Master's Degree

Degree Discipline

Biotechnology

DOI

10.58837/CHULA.THE.2004.1052

Abstract

The purpose of this research was to isolate bioactive compounds from endophytic fungi isolated from Kaemperia parviflora leaves were collected from 3 provinces in Thailand. The endophytic fungi were isolated using surface-sterillization technique and obtained 36 isolates. All isolates were examined antimicrobial activity using dual culture agar diffusion technique. Endophytic fungus isolate KPCH007 cultured on malt extract agar had the best antimicrobial activity because it can inhibited the growth of test gram positive Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus and negative bacteria Pseudomonas aeruginosa. Based on morphology and nucleotide sequencing analysis of ITS regions of rDNA, endophytic fungus isolate KPCH007 was identified as Alternaria tenuissima. Isolation of culture broth EtOAc crude extract of endophytic fungus isolate KPCH007 cultivated in malt extract broth gave compound 1, compound 2 and compound 3. Isolation of mycelia EtOAc crude extract gave mixture 4, mixture 5 and compound 6. The structure elucidation of these compounds was achieved by analysis of spectroscopic data and physical properties. Compound 1 was identified as 1-methyl-2-pyrrolidone. Compound 2 was identified as dehydroaltenusin. Compound 3 was identified as 1,6-dihydroxy-3-methoxy-8-methyl-9H-xanthen-9-one. From the mycelia ; Mixture 4 was obtained as yellow liquid and it was identified as a mixture of triglycerides. Mixture 5 was a mixture of macrosporin and alternariol-9-methyl ether and Compound 6 was identified as alternariol-9-methyl ether. Antimicrobial activities and cytotoxicity of the pure compound were tested. For antimicrobial activities, Compound 1 was found to exhibit activity against B. subtilis | S. aureus, P. aeruginosa and E. coli. with the MIC value of 31.25, 31.25, 62.50 and 62.50 microgram/ml. Mixture 5 was found to exhibit activity against all four bacteria with the MIC value of 125, 250, 250, and 250 microgram/ml. Compound 6 was found to exhibit activity against all four bacteria with the MIC value of 62.50, 62.50, 125, 125 microgram/ml and inhibited C. albicans at 250 microgram/ml., respectively. In addition, compound 1 can exhibited cytotoxic activities against SW620 (colon), BT474 (breast), KATO-3 (gastric), HEP-G2 (hepatoma) and CHAGO (lung) cell line with IC[subscript 50] >10, >10, >10, >10, 8.4 microgram/ml, Compound 3 with IC[subscript 50] >10, 7.4, >10, >10, >10 microgram/ml, Mixture 5 with IC[subscript 50] >10, 6.4, >10, 10, >10 microgram/ml and Compound 6 with IC[subscript 50] 10, 6.4, 8.8, 7.9 and 10 microgram/ml, respectively.

Other Abstract (Other language abstract of ETD)

วัตถุประสงค์ของงานวิจัยนี้เพื่อแยกสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพจากราเอนโดไฟต์ที่แยกได้จากตัวอย่างใบกระชายดำ Kaempferia parviflora ที่สุ่มเก็บจาก 3 จังหวัดในประเทศไทยโดยใช้เทคนิคฆ่าเชื้อที่ผิวและได้ 36 ไอโซเลต จากการทดสอบฤทธิ์ต้านจุลินทรีย์โดยวิธี Dual culture agar diffusion technique ของราเอนโดไฟต์ที่แยกได้ พบว่า ราเอนโดไฟต์สายพันธุ์ KPCH007 เมื่อเพาะเลี้ยงบนอาหาร มอลท์ เอกซ์แทรกซ์ มีฤทธิ์ยับยั้งจุลินทรีย์ทดสอบดีที่สุด เนื่องจากเป็นราเอนโดไฟต์ที่สามารถยับยั้งจุลินทรีย์ทดสอบได้ทั้งแบคทีเรียแกรมบวก Bacillus subtilis และ Staphylococcus aureus แบคทีเรียแกรมลบ Pseudomonas aeruginosa เมื่อทำการจัดจำแนกสายพันธุ์โดยศึกษาลักษณะทางสัณฐานวิทยา และการวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์ในบริเวณ ITS ของ rDNA พบว่าราเอนโดไฟต์ ไอโซเลต KPCH007 คือ Alternaria tenuissima ทำการแยกสารสกัดด้วยเอธิลแอซิเตตจากน้ำเลี้ยงเชื้อของราเอนโดไฟต์ ไอโซเลต KPCH007 ที่เพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อเหลว มอลท์ เอกซ์แทรกซ์ ได้สารบริสุทธิ์ 1 สารบริสุทธิ์ 2 และ สารบริสุทธิ์ 3 ส่วนสารสกัดด้วยเอธิลแอซิเตตจากเส้นใยแยกได้ ของผสม 4 ของผสม 5 และ สารบริสุทธิ์ 6 เมื่อวิเคราะห์โครงสร้างของสารที่แยกได้โดยอาศัยคุณสมบัติทางกายภาพและเทคนิคทางสเปกโตรสโกปี พบว่า สารบริสุทธิ์ 1 คือ 1-methyl-2-pyrrolidone, สารบริสุทธิ์ 2 คือ dehydroaltenusin, สารบริสุทธิ์ 3 คือ 1,6-dihydroxy-3-methoxy-8-methyl-9H-xanthen-9-one และจากเส้นใย ของผสม 4 คือ triglycerides, ของผสม 5 คือ macrosporin and alternariol-9-methyl และสารบริสุทธิ์ 6 คือ Alternariol-9-methyl และหาสูตรโครงสร้างของสารเหล่านี้ โดยอาศัยคุณสมบัติทางกายภาพเทคนิคแกสโครมาโทกราฟี และเทคนิคทางสเปกโทสโกปี นำสารบริสุทธิ์ที่แยกได้มาทดสอบฤทธิ์ทางชีวภาพในการยับยั้งจุลินทรีย์และทดสอบความเป็นพิษต่อเซลมะเร็งคน 5 ชนิด พบว่าสารบริสุทธิ์ 1 แสดงฤทธิ์ต้านแบคทีเรีย B. subtilis, S. aureus, P. aeruginosa และ E. coli ด้วยค่า MIC 31.25, 31.25, 62.50 และ 62.50 microgram/ml, สารบริสุทธิ์ 5 แสดงฤทธิ์ต้านแบคทีเรีย B. subtilis, S. aureus, P. aeruginosa และ E. coli ด้วยค่า MIC 125, 250, 250 และ 250 microgram/ml และพบว่าสารบริสุทธิ์ 6 แสดงฤทธิ์ต้านแบคทีเรีย B. subtilis, S. aureus, P. aeruginosa, E. coli และ C. albicans ด้วยค่า MIC 62.50, 62.50, 125, 125 และ 250 microgram/ml ตามลำดับ นอกจากนี้ สารบริสุทธิ์ 1 มีฤทธิ์ยับยั้งเซลล์มะเร็ง SW620 (ลำไส้ใหญ่) BT474 (เต้านม) KATO-3 (กระเพาะอาหาร) HEP-G2 (ตับ) และ CHAGO (ปอด) มีค่า IC[subscript 50] เท่ากับ >10, >10, >10, >10, 8.4 microgram/ml สารบริสุทธิ์ 3 มีฤทธิ์ยับยั้งเซลล์มะเร็ง มีค่า IC[subscript 50] เท่ากับ >10, 7.4, >10, >10, >10 สารบริสุทธิ์ 5 มีฤทธิ์ยับยั้งเซลล์มะเร็งมีค่า IC[subscript 50] เท่ากับ >10, 6.4, >10, 10,>10 microgram/ml และสารบริสุทธิ์ 6 มีฤทธิ์ยับยั้งเซลล์มะเร็งมีค่า IC[subscript 50] 10, 6.4, 8.8, 7.9 และ 10 microgram/ml ตามลำดับ

Link to Full Text

Share

COinS