Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD)

ภาวะเหมาะสมในการสร้างผักบุ้ง Ipomoea aquatica ดัดแปลงพันธุ์โดยวิธีการใช้ Agrobacterium tumefaciens

Other Title (Parallel Title in Other Language of ETD)

Opimal conditions for the construction of transgenic pakbung Ipomoea aquatica via Agrobacterium tumefaciens

Year (A.D.)

2002

Document Type

Thesis

First Advisor

อัญชริดา อัครจรัลญา

Faculty/College

Faculty of Science (คณะวิทยาศาสตร์)

Degree Name

วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Degree Level

ปริญญาโท

Degree Discipline

จุลชีววิทยาทางอุตสาหกรรม

DOI

10.58837/CHULA.THE.2002.970

Abstract

ภาวะที่เหมาะสมในการสร้างผักบุ้ง lpomoea aquatica ดัดแปลงพันธุ์โดยวิธีการใช้ Agrobacterium tumefaciens สายพันธุ์ EHA101 ที่มีพลาสมิด pBIH1-IG(SX) ซึ่งมียีนประมวลรหัสบีตา-กลูคูโรนิเดสเป็นยีนรายงานผล ยีนต้านต่อสารปฏิชีวนะไฮโกรมัยซินและยีนต้านต่อกานามัยซินเป็นยีนคัดเลือก เป็นดังนี้ ใช้เชื้อ A. tumefaciens สายพันธุ์ EHA101 ที่มี พลาสมิด pBIH1-IG(SX) ซึ่งเจริญในระยะ late log phase (24 ชั่วโมง) ความเข้มข้นเซลล์ของ A. tumefaciens 9.0 x 106 เซลล์ต่อมิลลิลิตร เติมอะซิโตไซริงโอนความเข้มข้นสุดท้าย 50 ไมโครโมลาร์ในขั้นตอน cocultivation และบ่มเชื้อ A. tumefaciens ร่วมกับ cotyledon explants ของผักบุ้งอายุ 7 วัน เป็นเวลา 2 ชั่วโมง ที่ภาวะเหมาะสมประสิทธิภาพการถ่ายโอนยีนซึ่งตรวจสอบจากการแสดงออกของยีนประมวลรหัสบีตา-กลูคูโรนิเดสใน cotyledon explants หลังขั้นตอนการ cocultivation มีค่าเท่ากับ 75 เปอร์เซ็นต์ ต้นผักบุ้งทรานสฟอร์แมนท์มีการแสดงออกของยีนประมวลรหัสบีตา-กลูคูโรนิเดสที่ใบ ลำต้นและราก เมื่อตรวจสอบด้วยวิธี histochemical GUS assay การตรวจสอบยืนยันการมีอยู่ของยีนประมวลรหัสบีตา-กลูคูโรนิเดส และยีนต้านต่อสารปฏิชีวนะไฮโกรมัยซิน โดยวิธี PCR พบว่ามียีนทั้งสองสอดแทรกในโครโมโซมของผักบุ้งพันธุ์ทรานสฟอร์แมนท์จริง

Other Abstract (Other language abstract of ETD)

Optimal conditions for the construction of transgenic Pakbung (lpomoea aquatica) via Agrobacterium tumefaciens using A. tumefaciens EHA101 harbouring plasmid pBIH1-IG(SX) having β-glucuronidase gene as a reporter gene, hygromycin phosphotransferase gene (hygromycin resistance gene) and neomycin phosphotransferase II gene (kanamycin resistance gene) as selectable marker genes were as followed: late log phase cells (24 hours culture) of A. tumefaciens at 9.0 x 106 cells/ml. cocultivated with 7-days old l. aquatica cotyledon explants in the presence of 50 β-glucuronidase activity. By histochemical GUS assay, expression of β-glucuronidase was detected in leave, shoot and root of transgenic l. aquatica. The existence of β-glucuronidase and hygromycin phosphotransferase genes in the chromosomal DNA of transgenic l. aquatic were confirmed by PCR method.

Link to Full Text

Share

COinS