Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD)

การเปรียบเทียบลักษณะเฉพาะของนิวโรเปปไทด์จากก้านตาของกุ้งกุลาดำ Penaeus monodon โดยใช้ไฮเพอร์ฟอร์แมนซ์ลิควิดโครมาโทกราฟีและเมทริกซ์-แอสซิสเทดเลเซอร์ดีซอร์พชันไอออไนเซชันแมสสเปกโทรเมทรี

Other Title (Parallel Title in Other Language of ETD)

Comparison of neuropeptide profiles from the eyestalk of Penaeus monodon using high performance liquid chromatography and matrix-assisted laser desorption ionization mass spectrometry

Year (A.D.)

2001

Document Type

Thesis

First Advisor

อมร เพชรสม

Second Advisor

ไพศาล สิทธิกรกุล

Faculty/College

Faculty of Science (คณะวิทยาศาสตร์)

Degree Name

วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Degree Level

ปริญญาโท

Degree Discipline

เทคโนโลยีชีวภาพ

DOI

10.58837/CHULA.THE.2001.856

Abstract

การแยกสารคล้ายแพนครีเอทิคโพลีเปปไทด์ (PP-like substance) จากก้านตาของกุ้งกุลาดำจำนวน 7,500 ก้านตาโดยการสกัดด้วยสารละลายเมทานอล-กรดอะซิติก-น้ำ (90 : 1 : 9) นำไปแยกผ่าน C18 Sep-Pak cartridge และนำไปทำให้บริสุทธิ์ต่อด้วย RP-HPLC 5-6 ขั้นตอน โดยใช้คอลัมน์ C18, C8 และ Cyano ระบบตัวทำละลาย 3 ระบบคือ acetonitrile / trifluoroacetic acid, acetonitrile / heptafluorobutyric acid และ acetonitrile / triethylamine การติดตามสารคล้าย PP ในระหว่างการทำให้บริสุทธิ์ใช้วิธี Dot-enzyme linked immunosorbant assay (Dot-ELISA) โดยใช้ rabbit anti-human pancreatic polypeptide C-terminal hexapeptide (PP6) antiserum จากแฟรกชั่นที่ 19, 23, 24, 26 และ 27 ของ RP-HPLC ในขั้นตอนที่ 1 ได้สารคล้าย PP ที่คาดว่ามีความบริสุทธิ์มากพอที่จะนำไปหาลำดับของกรดอะมิโนต่อไป 4 รูปแบบ ได้แก่ PPL1, PPL2, PPL3 และ PPL4 มีน้ำหนักโมเลกุลที่แตกต่างกันคือ 801.5, 1137.1, 1050.0 และ 1165.9 ดาลตัน ตามลำดับ เมื่อตรวจหาน้ำหนักโมเลกุลโดย Matrix assisted laser desorption ionization time-of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) จากน้ำหนักโมเลกุลที่ได้จึงคาดว่าสารคล้าย PP ที่แยกได้นี้เป็นเปปไทด์สายสั้นที่ประกอบด้วยกรดอะมิโนไม่เกิน 9 หน่วย คล้ายกับ PYF จากสมองของปลาหมึกกล้วย Loligo vulgaris แต่มีน้ำหนักโมเลกุลที่ต่างออกไปจึงคาดว่าสารคล้าย PP ที่ได้นี้น่าจะมีกรดอะมิโนในสายของเปปไทด์ที่แตกต่างกัน

Other Abstract (Other language abstract of ETD)

Isolation of the PP-like substances (PPLs) in Penaeus monodon was performed using 7,500 eyestalks extracted in methanol-acetic acid-water (90 : 1 : 9). The extract was partially purified using C18 cartridge and was further purified by 5 to 6 steps of RP-HPLC using C18, C8 and Cyano column with 3 solvent systems ; acetonitrile / trifluoroacetic acid, acetonitrile / heptafluorobutyric acid and acetonitrile / triethylamine and the detection of PPLs in the fractions during each step of purification was by Dot-enzyme linked immunosorbant assay (Dot-ELISA) using polyclonal antiserum raised against human pancreatic polypeptide C-terminal hexapeptide (PP6). Four isoforms of PPLs (PPL1, PPL2, PPL3 and PPL4) obtained from fractions 19, 23, 24, 26 and 27 of the first RP-HPLC step and having molecular weight of 801.5, 1137.1, 1050.0 and 1165.9 dalton, respectively, determined by Matrix assisted laser desorption ionization time-of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS). From the molecular weight of these isoforms, it revealed that these peptides should not consisted of more than nine amino acid residues which were similar to that of PYF found in the brain of squid, Loligo vulgaris. However the different molecular weight that obtained are expected to be different amino acid in peptide chain from brain squid PYF and PP-like peptides from other animals.

Link to Full Text

Share

COinS