Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD)
การผลิตและกิจกรรมของรีคอมบิแนนท์เอนไซม์ไฮยาลูโรนิเดสจาก Streptococcus pyogenes ATCC 6550 ใน Escherichia coli JM 109
Other Title (Parallel Title in Other Language of ETD)
Production and activity of recombinant hyaluronidase from Streptococcus pyogenes ATCC 6550 in Escherichia Coli JM 109
Year (A.D.)
2012
Document Type
Thesis
First Advisor
ชุติมณฑน์ สถิรพิพัฒน์กุล
Second Advisor
ศรีเมฆ ชาวโพงพาง
Faculty/College
Faculty of Engineering (คณะวิศวกรรมศาสตร์)
Degree Name
วิศวกรรมศาสตรมหาบัณฑิต
Degree Level
ปริญญาโท
Degree Discipline
วิศวกรรมเคมี
DOI
10.58837/CHULA.THE.2012.1156
Abstract
การศึกษาการแสดงออกของยีนไฮยาลูโรนิเดส จาก Streptococcus pyogenes ATCC 6550 ใน Escherichia coli JM109 เมื่อใช้ pQE80-L vector system พบว่า มีขนาดของยีนประมาณ 2,400 คู่เบส โดยรีคอมบิแนนท์โปรตีนทำการตรวจสอบขนาดโมเลกุลด้วยเทคนิค SDS-PAGE พบว่าในสารละลายเซลล์มีขนาดโมเลกุลประมาณ 88 กิโลดาลตัน โดยเอนไซม์ไฮยาลูโรนิเดสที่แยกได้จากสารละลายตะกอนเซลล์ ถูกตรวจวัดได้ในระดับที่สูงกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับเอนไซม์จาก supernatant เมื่อทำการศึกษาปัจจัยที่มีผลต่อการเลี้ยงของการผลิตเอนไซม์ไฮยาลูโรนิเดสโดยเชื้อสายพันธุ์นี้ในระดับขวดเขย่า พบว่า สภาวะที่เหมาะสมต่อการเพาะเลี้ยงเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อ 2xYT ที่มีปริมาตรของอาหารเลี้ยงเชื้อต่อปริมาตรขวดเขย่า 40 เปอร์เซ็นต์ คือ ที่อุณหภูมิ.35 องศาเซลเซียส ที่ค่าความเป็นกรด-ด่าง 8 และ 200 รอบการเขย่าต่อนาที สารละลายเอนไซม์ที่ไม่ทำให้บริสุทธิ์ แสดงค่ากิจกรรมสูงสุดในช่วงอุณหภูมิ 35.ถึง.40 องศาเซลเซียส ที่ค่าความเป็นกรด-ด่าง 7 การศึกษาจลนพลศาสตร์ของเอนไซม์ที่สภาวะค่าความเป็นกรด-ด่าง 7 และอุณหภูมิ.37 องศาเซลเซียส ด้วยวิธี Morgan-Elson colourimetric assay พบว่า Km และ Vmax มีค่าเท่ากับ 0.78 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร และ 9.3 มิลลิยูนิตต่อมิลลิลิตร จาก Lineweaver–Burk plot
Other Abstract (Other language abstract of ETD)
The expression of hyaluronidase gene from Streptococcus pyogenes ATCC 6550 in Escherichia coli JM109 by using pQE80-L vector system was encoded at approximately 2,400 bp. The recombinant protein detected by SDS-PAGE had an expressed molecular mass of ~88 kDa size in the soluble cell. Hyaluronidase extracted from the soluble crude cell was detected in higher level, compared to the enzyme from supernatant. The effects of cultivation parameters on the production of hyaluronidase by this strain in shaking-flask level were investigated. The optimum cultivation conditions in 2xYT medium at 40% volume of medium per flask volume ratio were observed at 35 °C, pH = 8 and 200 rpm. The crude enzyme showed maximum activity at the temperature ranging from 35 °C to 40 °C with the pH of 7. The kinetics of enzyme was investigated at pH = 7 and 37°C using the Morgan-Elson colourimetric assay method. Km and Vmax values were 0.78 mg/ml and 9.3 mU/ml from the Lineweaver–Burk plot.
Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-No Derivative Works 4.0 International License.
Recommended Citation
เถาสุวรรณ, สิทธิศักดิ์, "การผลิตและกิจกรรมของรีคอมบิแนนท์เอนไซม์ไฮยาลูโรนิเดสจาก Streptococcus pyogenes ATCC 6550 ใน Escherichia coli JM 109" (2012). Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD). 68990.
https://digital.car.chula.ac.th/chulaetd/68990