Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD)

การแยกแบคทีเรียทนร้อนและลักษณะสมบัติบางประการของไลเปสทนร้อนที่ทำให้บริสุทธิ์บางส่วน

Other Title (Parallel Title in Other Language of ETD)

Isolation of thermotolerant bacteria and characterization of a partially purified thermostable lipase

Year (A.D.)

2002

Document Type

Thesis

First Advisor

ชาญวิทย์ โฆษิตานนท์

Faculty/College

Faculty of Science (คณะวิทยาศาสตร์)

Degree Name

วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Degree Level

ปริญญาโท

Degree Discipline

จุลชีววิทยาทางอุตสาหกรรม

DOI

10.58837/CHULA.THE.2002.974

Abstract

จากตัวอย่างดิน 8 ตัวอย่าง และตัวอย่างน้ำ 1 ตัวอย่าง ซึ่งเก็บจากแหล่งที่คาดว่าจะมีเชื้อแบคทีเรียทนร้อนที่ผลิตไลเปสได้ นำมาเลี้ยงที่อุณหภูมิ 65 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 2 วัน สามารถคัดแยกแบคทีเรียที่ผลิตไลเปสได้ 20 สายพันธุ์ โดยแบคทีเรียสายพันธุ์ K3 มีแอคติวิตีและแอคติวิตีจำเพาะของไลเปสมากที่สุดคือ 0.084 หน่วยต่อมิลลิกรัมโปรตีน จากการจำแนกทางสรีรวิทยาและชีวเคมีเบื้องต้น ตามวิธีของ Bergey's Manual of Systematic Bacteriology พบว่าเป็นแบคทีเรียสายพันธุ์ Bacillus stearothermophilus งานวิจัยนี้ศึกษาการทำไลเปสจากเชื้อ K3 ให้บริสุทธิ์บางส่วนโดยคอลัมน์ดีอีเออี ไบโอ-เจลเอ พบว่ามีแอคติวิตีของไลเปส 2 ชนิด คือไลเปสที่ไม่เกาะกับตัวกลางคอลัมดีอีเออี ไบโอ-เจล เอ (unbound) และไลเปสที่เกาะกับตัวกลางคอลัมน์ดีอีเออี ไบโอ-เจล เอ (bound) มีความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้น 3.56 เท่า และ 2.80 เท่า เหลือแอคติวิตี 53.22 เปอร์เซ็นต์ และ 7.29 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ จากการวิเคราะห์น้ำหนักโมเลกุลโดยวิธีโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต พอลิอะคริลาไมด์เจลอีเลคโทรโฟริซิสของไลเปสที่ไม่เกาะกับตัวกลาง (unbound) พบว่ามีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 22,000 ดาลตัน จากการศึกษาสมบัติของไลเปสที่ทำให้บริสุทธิ์บางส่วนพบว่า ไลเปสที่ไม่เกาะกับตัวกลาง (unbound) และไลเปสที่เกาะกับตัวกลางคอลัมน์ดีอีเออี ไบโอ-เจล เอ (bound) มีอุณหภูมิที่เหมาะสมคือ 60 องศาเซลเซียส และ 70 องศาเซลเซียส ตามลำดับ เอนไซม์ทั้งสองชนิดมีความเป็นกรดด่างที่เหมาะสมคือ 8.0 มีความเสถียรต่ออุณหภูมิสูงถึง 70 องศาเซลเซียส มีความเสถียรต่อความเป็นกรดด่างในช่วง 7.0-7.5 และเสถียรต่อสภาวะการเก็บที่ -20 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 14 วัน

Other Abstract (Other language abstract of ETD)

From 8 soil samples and 1 water sample collected from potential sources of having thermophilic lipase producing bacteria, 20 isolates with lipase activity were obtained after incubating at 65℃ in a medium containing tributyrin as a substrate for 2 days. Among these isolates, K3 was the highest lipase producing strain. The enzyme specific activity was 0.084 unit/miligram protein. According to Bergey's Manual Systematic Bacteriology, K3 was identified as Bacillus stearothermophilus. The K3's lipase was partially purified by ion exchange chromatography using DEAE Bio-Gel A. From the column, lipase activity was found in both bound and unbound fractions. After pooled and concentrated, unbound lipase specific activity was increased 3.56 folds and 2.80 folds for the bound lipase. Enzyme recovery yields for the unbound and bound were 53.22 and 7.29 percent respectively. The apparent molecular weight of the partially purified unbound lipase was 22,000 daltons. The optimal temperatures of the unbound and bound lipase were 60 and 70℃, respectively. Both of them had the same optimal pH of 8.0. The enzymes were stable up to 70℃, at pH 7.0-7.5 and can be stored at 20℃ for 14 days.

Link to Full Text

Share

COinS