Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD)
Other Title (Parallel Title in Other Language of ETD)
การแสดงออกและลักษณะสมบัติของเด็กซ์แทรนซูเครสจาก leuconostoc citerum ABK-1
Year (A.D.)
2021
Document Type
Thesis
First Advisor
Rath Pichyangkura
Faculty/College
Faculty of Science (คณะวิทยาศาสตร์)
Department (if any)
Department of Biochemistry (fac. Science) (ภาควิชาชีวเคมี (คณะวิทยาศาสตร์))
Degree Name
Master of Science
Degree Level
Master's Degree
Degree Discipline
Biochemistry and Molecular Biology
DOI
10.58837/CHULA.THE.2021.12
Abstract
Dextransucrase is an enzyme in the glycoside hydrolase 70 family that catalyze the hydrolysis of sucrose to fructose and glucose, the glucose residues are transferred to synthesize dextran via transglycosylation reaction. Dextransucrase from Leuconostoc citreum ABK-1 (Lcdextransucrase ), which has 99.5% homology with dextransucrase in the NCBI database, was cloned, expressed, and purified. The size of the Lcdextransucrase was predicted by ExPASy and the result showed that its size was 168 kDa with a pI of 5.15. Protein expression was confirmed by western blot analysis. Lcdextransucrase was purified through Ni-sepharose coupled with DEAE anion exchange column chromatography to approximately 80% purity. Moreover, the dextran product was analyzed by TLC, HPAEC-PAD, and NMR confirming that the product was dextran where glucose residues were mainly linked via a alpha-1,6 with some alpha-1,2 or alpha-1,3 branching. The dextran product may be applied and use as a prebiotic or functional food.
Other Abstract (Other language abstract of ETD)
เด็กซ์แทรนซูเครสเป็นเอนไซม์ในตระกูลไกลโคไซด์ไฮโดรเลส 70 ที่มีเร่งปฏิกิริยาการไฮโดรไลซ์น้ำตาลซูโครสให้เป็นน้ำตาลฟรุกโตส และน้ำตาลกลูโคส นำเอาน้ำตาลกลูโคสมาสร้างสายพอลิเมอร์ของเด็กซ์แทรนโดยอาศัยการส่งถ่ายของโมเลกุลน้ำตาลกลูโคส เราพบยีนเด็กซ์แทรนซูเครสใน Leuconostoc citreum ABK-1 (Lcdextransucrase) และทำการยืนยันทางยีนว่าตรงกันกับเด็กซ์แทรนซูเครสใน Leuconostoc citrem DS ด้วยความเหมือนกัน 99.50% กับฐานข้อมูล NCBI ในงานนี้เราได้แสดงออกและหาลักษณะสมบัติของแด็กซ์แทรนซูเครสจาก Leuconostoc citreum ABK-1 รวมถึงศึกษาผลิตภัณฑ์ที่ได้ จากการทดลองเราสามารถโคลนเด็กซ์แทรนซูเครสยีนที่มีความยาวของยีน 4,935 คู่เบสเข้าไปในเวกเตอร์ pET21b โดยเชื่อมต่อเข้ากับ His-tag และแสดงออกโปรตีน โดยสภาวะที่เหมาะสมที่สุดในการแสดงออกของโปรตีน คือ ที่อุณหภูมิ 20 องศาเซลเซียส และชักนำด้วย IPTG ความเข้มข้น 0.5 mM จากการคำนวณโดย ExPASy พบว่าเด็กซ์แทรนซูเครสมีค่า pI อยู่ที่ 5.15 และมีน้ำหนักโมเลกุล 168 กิโลดาลตัน เรายืนยันการแสดงออกของโปรตีนโดยอาศัย Western blot และทำโปรตีนให้บริสุทธิ์โดยใช้ นิเกิล และ DEAE anion exchange คอลัมน์พบว่าสามารถทำให้โปรตีนบริสุทธิ์ขึ้น 80% เมื่อทำการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ของเด็กซ์แทรนซูเครสโดยอาศัย TLC HPAEC-PAD และ NMR พบว่าผลิตภัณฑ์ที่ได้เป็นเด็กซ์แทรน ที่กลูโคสเชื่อมต่อกันด้วยพันธะ แอลฟา-1,6 ไกลโคซิดิก และอาจมีโซ่กิ่ง แบบ แอลฟา-1,2 หรือ แอลฟา-1,3 นอกจากนี้คุณสมบัติของผลิตภัณฑ์สามารถนำไปประยุกต์ใช้ในเป็นพรีไบโอติกหรืออาหารฟังก์ชันได้
Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-No Derivative Works 4.0 International License.
Recommended Citation
Bulan, Kakuttapun, "Expression and characterization of dextransucrase from leuconostoc citreum ABK-1" (2021). Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD). 4554.
https://digital.car.chula.ac.th/chulaetd/4554