Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD)

สภาวะที่เหมาะสมในการผลิตสารตั้งต้นสเตียรอยด์จากสเตียรอลพืช โดย Mycobacterium fortuitum

Other Title (Parallel Title in Other Language of ETD)

Optimal conditions for the prodection of steroid precursors from plant sterols by Mycobacterium fortuitum

Year (A.D.)

1991

Document Type

Thesis

First Advisor

ไพเราะ ปิ่นพานิชการ

Second Advisor

นลิน นิลอุบล

Faculty/College

Graduate School (บัณฑิตวิทยาลัย)

Degree Name

วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Degree Level

ปริญญาโท

Degree Discipline

เทคโนโลยีชีวภาพ

DOI

10.58837/CHULA.THE.1991.587

Abstract

งานวิจัยนี้ศึกษาสภาวะที่เหมาะสมในการเจริญของ Mycobacterium fortuitum CBS 313.79 และการผลิตสารตั้งต้นสเตียรอยด์จากสเตียรอลพืชโดยจุลินทรีย์ดังกล่าว พบว่า อาหารเลี้ยงหัวเชื้อที่เหมาะสมสำหรับการเจริญ คือ นิวเตรียนบรอท ที่เสริมด้วย 1.0 กรัม/ลิตร ผงสกัดยีสต์ 5.0 กรัม/ลิตร กลีเซอรอล และ 1.0 กรัม/ลิตร ทวีน 80 อาหารเลี้ยงเชื้อที่เหมาะสมสำหรับเปลี่ยนสเตียรอลพืชไปเป็นสารตั้งต้นสเตียรอยด์ คือ 4-แอนโดรสตีน-3, 17-ไดโดน (AD) ประกอบด้วยสารละลายแป้งที่ย่อยด้วยเอนไซม์เทอร์มามิล ซึ่งมีปริมาณน้ำตาลรีดิวส์ 20.8% (นน./นน.) หรือปริมาณกลูโคส 0.8% (นน./นน.) และมีปริมาณของแข็งทั้งหมด (total solid content) 5.0 กรัม/ลิตร เป็นแหล่งคาร์บอน (NH₄)₂HPO₄ ที่ความเข้มข้นของไนโตรเจนทั้งหมดเป็น 0.50 กรัม/ลิตร KH₂PO₄ 0.50 กรัม/ลิตร CaCo₃ 3.0 กรัม/ลิตร MgSO₄ 2.0 กรัม/ลิตร NaCL 0.4 กรัม/ลิตร และสารละลายสเตียรอลพืชในคลอโรฟอร์มที่ความเข้มข้น 0.84 มก./มล. ของอาหารเลี้ยงเชื้อเป็นสารตั้งต้น และปรับ pH ของอาหารเลี้ยงเชื้อเป็น 7.0-8.0 ภายใต้สภาวะการเพาะเลี้ยงที่เหมาะสม คือ เขยทา 200 รอบต่อนาที ที่ 30 ̊ซ. เป็น เวลา 5 วัน จะให้การเปลี่ยนสเตียรอลเป็น AD สูงสุด 83.6% งานวิจัยนี้ยังรายงานวิธีที่เหมาะสมในการสกัดแยก AD ออกจากน้ำหมักและทำให้บริสุทธิ์ พบว่า ตัวทำละลายที่เหมาะสมในการสกัด คือ เอทธิลอะซีเตท ในอัตราส่วนน้ำหมัก:เอทธิลอะซีเตท เท่ากับ 1:2 (ปริมาตร/ปริมาตร) การสกัดทำซ้ำ 2 ครั้ง ครั้งละ 15 นาที สามารถสกัด AD ออกมาได้ 97.99% ของปริมาณที่มีอยู่ในน้ำหมัก การทำ AD ให้บริสุทธิ์ใช้วิธีโครมาโตกราฟีบนซิลิกาเจลคอลัมน์ 2 ครั้ง โดยครั้งแรกชะด้วย เอทธิลอะซีเตท:คลอโรฟอร์ม ในอัตราส่วน 15:85 (ปริมาตร/ปริมาตร) นำสารที่ได้มาทำให้บริสุทธิ์ยิ่งขึ้นโดยผ่านซิลิกาเจลคอลัมน์ที่ 2 ซึ่งชะด้วย ไซโคลเฮกเซน:เอทธิลอะซีเตท ในอัตราส่วน 4:1 (ปริมาตร/ปริมาตร) ระเหยตัวทำละลายออก และตกผลึกสารประกอบที่ได้ด้วยตัวทำละลายผสม คือ เอทธิลอะซีเตทกับเฮกเซน ได้ผลึกสีขาวที่มีความบริสุทธิ์ 97% และได้ผลิตผล 18.6% ผลการวิเคราะห์ทางเคมีของสารประกอบที่ได้เปรียบเทียบกับสารมาตรฐาน AD พบว่า ข้อมูลการวิเคราะห์จุดหลอมเหลว แมสสเปกโตรสโคปี อินฟราเรดสเปกโตรสโคปี และโปรตอน-นิวเคลียร์แมกเนติกเรโซแนนซ์ ยืนยันว่าสารประกอบที่ได้คือ 4-แอนโดรสตีน-3, 17-ไดโอน

Link to Full Text

Share

COinS