Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD)

การคาพาซิเตทอสุจิและวิธีการศึกษาโครโมโซมอสุจิของกระบือปลัก (Bubalus bubalis Linn.)

Other Title (Parallel Title in Other Language of ETD)

Sperm capacitation and study of sperm chromosome of swamp buffalo (Bubalus bubalis Linn)

Year (A.D.)

1991

Document Type

Thesis

First Advisor

มณีวรรณ กมลพัฒนะ

Faculty/College

Graduate School (บัณฑิตวิทยาลัย)

Degree Name

วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Degree Level

ปริญญาโท

Degree Discipline

พฤกษศาสตร์

DOI

10.58837/CHULA.THE.1991.643

Abstract

จากการศึกษาการคาพาซิเดทอสุจิของกระบือปลัก โดยนำอสุจิแช่แข็งของกระบือปลักมาละลายในน้ำอุ่น อุณหภูมิ 37℃ และปั่นแยกในสารละลายเปอร์คอล (30% และ 40% เปอร์คอลในน้ำยาเพาะเลี้ยง BWW อสุจิที่ได้นำมาละลายในน้ำยาเพาะเลี้ยง BWW 5 มล. (0.5 mM Hypotaurine, 10 mM Cafeine, 0.6% BSA, pH 7.4) และปั่นแยกอีกครั้งที่ 500 g เป็นเวลา 10 นาที นำอสุจิมาปรับความเข้มข้นด้วย BWW และคาพาซิเดทในหลอดแก้วด้วยเฮปารินความเข้มข้น 10, 25, 50 และ 100 µg/ml ในเวลา 15, 30, 45 และ 60 นาที 5% CO₂ ที่อุณหภูมิ 38℃ ตรวจสอบ อสุจิที่ผ่านการคาพาซิเดทและอะโครโซมรี แอ็คชั่น โดยการให้อสุจิปฏิสนธิกับไข่แฮมสเตอร์ที่ไม่มีโซนาเพลลูซิดา จำนวน 6,949 ใบ ผสมอสุจิกับไข่เป็น เวลา 2 ชั่วโมง ใน 5% CO₂ ที่อุณหภูมิ 38℃ และเลี้ยงไข่ไว้ในน้ำยา Ham’s F-10 (10% FCS) เป็นเวลา 8 ชั่วโมง ในการตรวจสอบอัตราการปฏิสนธิ ซึ่งดูจากโปรนิวเคลียส พบว่า ความเข้มข้นและเวลาที่เหมาะสมในการคาพาซิเดทอสุจิ เมื่อเฮปารินความเข้มข้น 10 ถึง 25 µg/ml ในเวลา 15-45 นาที (69.2- 73.3%) จากการทดสอบใช้รูปแบบการหยดน้ำยาเพาะเลี้ยงแบบต่าง ๆ จำนวน 6 แบบ พบว่า หยดน้ำยามี อิทธิพลต่ออัตราการปฏิสนธิ หยดน้ำยาที่มีปริมาตร µg ต่อไข่ 5 ใบ จำนวน 6 หยดต่อจานเพาะเลี้ยง จัดวางตามแนวรัศมี มีศักยภาพในการเกิดการปฏิสนธิดีที่สุด ส่วนการศึกษาโครโมโซมอสุจิของกระบือปลัก ศึกษาจากไข่แฮมสเตอร์จำนวน 3,722 ใบ เมื่อเลี้ยงไข่ ครบ 8 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 38℃ ใน 5% CO₂ ใส่ podophyllotoxin และ vinblastine อย่างละ 0.06 µg/ml และเลี้ยงต่ออีก 12 ชั่วโมง เมื่อครบแล้วนำไข่มาใส่ hypotonic solution (1 % trisodium citrate) เป็นเวลา 3-6 นาที ที่อุณหภูมิห้อง ใน fixative ที่เย็น (ethanol : glacial acetic acid; 3:1) บนสไลด์ และย้อมสีโครโมโซมด้วย 20% Giemsa นาน 10 นาที ตรวจสอบโครโมโซม พบว่า มีเพียง 2 โอโอไซด์ (0.05%) ที่สามารถเห็นโครโมโซมของอสุจิกระบือปลักไม่สามารถตรวจสอบโครโมโซมได้ละเอียดเพาะโครโม โซมไม่กระจาย การศึกษานี้เป็นการศึกษาเบื้องต้น จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมอีก เพื่อที่จะนำมาใช้ในการปฏิสนธิ ในหลอดแก้วของกระบือจริง ๆ ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่า อสุจิกระบือปลักสามารถเกิดการคาพาซิเดทได้ โดยใช้เฮปารินและสามารถเจาะผ่านไข่แฮมสเตอร์ที่ไม่มีโซนาเพลลูซิดาได้

Link to Full Text

Share

COinS