Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD)
การแยกให้บริสุทธิ์ และตรวจสอบของโบรมิเลนจากต้นสับปะรด
Other Title (Parallel Title in Other Language of ETD)
Purification and characterization of bromelain from pineapple stem
Year (A.D.)
1988
Document Type
Thesis
First Advisor
วินิจ ชำวิวรรธน์
Second Advisor
สัณห์ พชิยยกุล
Faculty/College
Graduate School (บัณฑิตวิทยาลัย)
Degree Name
วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต
Degree Level
ปริญญาโท
Degree Discipline
เทคโนโลยีชีวภาพ
DOI
10.58837/CHULA.THE.1988.503
Abstract
การวิจัยเพื่อเพิ่มความบริสุทธิ์ของผงโบรมิเลนที่เตรียมโดยการตกตะกอนด้วยอะซีโตนให้สูงจขึ้นด้วยเทคนิคการไดอะไลซีส อุลตราฟิลเตรชัน คูโอไลซ์ ซี225 และเซฟาเดกซ์ จี 100 โครมาโตกราฟฟี พบว่า เทคนิคดังกล่าวไม่สามารถเพิ่มความบริสุทธิ์ขิง เอนไซม์ให้สูงขึ้นได้ไม่มากนัก (~ 1.4-2 เท่า) แอคติวิตีของผงโบรมิเลนมีค่าประมาณ 281-604 หน่วยซีดียูต่อมิลลิกรัมผง แอคติววิตีของโบรมิเลนในน้ำสกัดจากต้น สับปะรดสามารถกระตุ้นให้สูงขึ้นได้ด้วยกรดอะมิโนซีสเทอีนไฮโดรคลอไรด์ และโซเดียมเมทาไบซัลไฟท์ กรด เอทธิลลีนไดอะมีนเททระอะซีทิคสามารถเสริมฤทธิ์การกระตุ้นแอคติวิตีของเอนไซม์โดยกรดอะมิโนซีสเทอีน ไฮโดรคลอไรด์ได้ประมาณ 1.5 เท่า ผงโบรมิเลนที่ทำให้บริสุทธิ์บางส่วนโดยการตกตะกอนด้วยกรดโพลีอะไคร์ลิคจะมีแอคติวิตีต่อมิลลิกรัมผงสูงกว่าผงโบรมิเลนจากการตกตะกอนโดยอะซีโตนประมาณ 4-5 เท่า (~ 1941 หน่วยซีดียูต่อมิลลิกรัมผง) และให้ผลผลิตประมาณ 1.2 กรัมต่อกิโลกรัมต้นสับปะรด การทำให้เอนไซม์จากผงโบรมิเลนที่เตรียมได้บริสุทธิ์สูงขึ้นโดยใช้เทคนิคอุลตราฟิลเตรชัน คาร์บอกซีเมทธิลเซลลูโลสโครมาโตกราฟฟี เซฟาเดกซ์ จี 100 โครมาโตกราฟฟี หรือเทคนิคร่วมของคาร์บอกซีเมทธิลเซลลูโลสกับเซฟาเดกซ์ จี 100 โครมาโตกราฟฟีไม่มีผลในการเพิ่มแอคติวิตีของเอนไซม์ แต่จากการตรวจสอบด้วยเทคนิคโพลีอะไดร์ละไมด์เจล อิเลคโตรโฟริซีสพบว่ามีชนิดของโปรตีนในผงโบรมิเลนลดลง ผงโบรมิเลนที่มีความบริสุทธิ์ สูงนี้จะมีคุณสมบัติต่าง ๆ ในการเร่งปฏิกิริยาการไฮโดรไลซ์เคซีนเกือบไม่แตกต่างกันกับผงโบรมิเลนก่อนเพิ่มความบริสุทธิ์ ยกเว้นเอนไซม์ที่มีความบริสุทธิ์สูงจะมีความเสถียรต่ออุณหภูมิลดลง เอนไซม์โบรมิเลนสามารถตรึงบนคาร์บอกซีเมทธิลเซลลูโลสและเสริมด้วยกลูตารัลดีไฮด์ได้ โดยที่เอนไซม์ตรึงทั้งชนิดเสริมและไม่เสริมด้วยกลูตารัลดีไฮด์จะเร่งปฏิกิริยา ได้สูงสุดที่อุณหภูมิต่ำกว่าเอนไซม์อิสระ (45 °ซ สำหรับเอนไซม์ตรึงและ 65 °ซ สำหรับเอนไซม์อิสระ) โบรมิเลนตรึงมีความเสถียรต่ออุณหภูมิ (30-50 °ซ) สูงกว่าเอนไซมิอิสระอย่างชัดเจน นอกจากนี้การตรึงเอนไซม์บนคาร์บอนซีเมทธิลเซลลูโลสจะทำให้ความสามารถในการไฮโดรไลซ์สับสเตรทเคซีนเพิ่มขึ้นประมาณ 15-20 เท่าเมื่อเทียบกับเอนไซม์อิสระ
Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-No Derivative Works 4.0 International License.
Recommended Citation
ว่องนราธิวัฒน์, นิตยา, "การแยกให้บริสุทธิ์ และตรวจสอบของโบรมิเลนจากต้นสับปะรด" (1988). Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD). 44163.
https://digital.car.chula.ac.th/chulaetd/44163