Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD)
การแยกให้บริสุทธิ์และการศึกษาสมบัติของแอลคาไลน์โปรตีเอสจากเชื้อ Bacillus Subtilis TISTR 25
Other Title (Parallel Title in Other Language of ETD)
Purification and characterization of alkaline protease from Bacillus subtilis TISTR 25
Year (A.D.)
1989
Document Type
Thesis
First Advisor
เปี่ยมสุข พงษ์สวัสดิ์
Faculty/College
Graduate School (บัณฑิตวิทยาลัย)
Degree Name
วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต
Degree Level
ปริญญาโท
Degree Discipline
ชีวเคมี
DOI
10.58837/CHULA.THE.1989.525
Abstract
Bacillus subtilis TISTR 25 เป็นแบคทีเรียที่แยกได้จากดินในประเทศไทย สามารถถูกชักนำให้ผลิตเอนไซม์โปรตีเอสสูงขึ้นได้โดยเลี้ยงที่อุณหภูมิ 30 ̊ซ ในอาหารสูตรปรับต่ำที่เสริมด้วย 1 เปอร์เซนต์กลูตาเมท pH 6.0 และพบว่าการผลิตเอนไซม์โปรตีเอส ถูกกดดันในสภาวะที่มีน้ำตาลกลูโคสด้วยกระบวนการคาตาบอไลต์ รีเพรสชัน โดยการศึกษาผลของ Ethylenediamine tetraacetic acid และ Phenylmethylsulfonyl fluoride ต่อเอนไซม์แอคติวิตี พบว่าเอนไซม์โปรตีเอสที่แยกได้ในน้ำเลี้ยงเชื้อ ประกอบด้วยนิวทรัลและแอลคาไลน์โปรตีเอสในอัตราส่วนประมาณ 1:3 ซึ่งต่างจากเชื้อมาตรฐาน B. licheniformis ATCC 21415 ที่สร้างเอนไซม์แอลคาไลน์โปรตีเอสเป็นส่วนใหญ่ เมื่อตกตะกอนโปรตีนด้วยเกลือแอมโมเนียมซัลเฟต และแยกโดย CM-cellulose คอลัมน์โครมาโตกราฟฟี เอนไซม์แอลคาไลน์โปรตีเอสจากสายพันธุ์ TISTR 25 มีความบริสุทธิ์ขึ้น 2.3 เท่า จากการศึกษาสมบัติของแอลคาไลน์โปรตีเอสที่มีความบริสุทธิ์บางส่วนนี้ พบว่า เอนไซม์เป็นโพลีเพปไทด์สายเดี่ยว ไม่มีหน่วยย่อย และมีน้ำหนักโมเลกุล 27,000 ดาลตัน pH และอุณหภูมิที่เหมาะสมในการเร่งปฏิกิริยาคือ 8.5 และ 55 ̊ซ เอนไซม์ไฮโดรไลส์ได้ทั้งสับสเตรตธรรมชาติและสับสเตรตสังเคราะห์ โดยมีค่า K[subscript m] ต่อ casein, hemoglobin และ benzoyl tyrosine ethyl ester (BTEE) เท่ากับ 0.02, 0.07 และ 8.0 มิลลิโมล/ลิตร ตามลำดับ และมีค่า K[subscript m] ต่อ azocasein, azocoll คือ 3.03 และ 33.33 มก./มล. เอนไซม์มีความจำเพาะในการไฮโดรไลส์พันธะเพปไทด์ที่ปลายคาร์บอกซิลของกรดอะมิโน อาร์จินีน อะลานีน ลูซีน เฟนิลอะลานีน และเวลีน แอลคาไลส์โปรตีเอสที่แยกได้จาก B. subtilis TISTR 25 นี้ มีสมบัติบางประการต่างจากเอนไซม์ Subtilisin Carlsberg คือ pH และอุณหภูมิที่เหมาะสมในการเร่งปฏิกิริยา รวมทั้งแอฟฟินิตีต่อ casein และ BTEE ซึ่งคาดว่าเอนไซม์ทั้งสอง อาจมีส่วนประกอบกรดอะมิโนในบริเวณ binding site ต่างกัน เมื่อศึกษาความจำเพาะของเอนไซม์ในการไฮโดรไลส์พันธะเพปไทด์ โดยการวิเคราะห์ด้วยวิธีสเปคโตรโฟโตเมตรี และ TLC พบว่า เอนไซม์ที่แยกได้มีความจำเพาะไม่ต่างจากเอนไซม์ Subtilisin Carlsberg และ Nagarse แต่ต่างจากเอนไซม์ Trypsin ในสภาวะที่ทำการทดลอง
Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-No Derivative Works 4.0 International License.
Recommended Citation
จิโรจน์กุลกิจ, ปกรณ์, "การแยกให้บริสุทธิ์และการศึกษาสมบัติของแอลคาไลน์โปรตีเอสจากเชื้อ Bacillus Subtilis TISTR 25" (1989). Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD). 42196.
https://digital.car.chula.ac.th/chulaetd/42196