Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD)

การตรึงรูปเดกซ์แทรนเนสบนคาร์บอนกัมมันต์

Other Title (Parallel Title in Other Language of ETD)

Immobilization of dextranase on activated carbon

Year (A.D.)

1992

Document Type

Thesis

First Advisor

สุเทพ ธนียวัน

Second Advisor

ปราณี อ่านเปรื่อง

Faculty/College

Graduate School (บัณฑิตวิทยาลัย)

Degree Name

วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Degree Level

ปริญญาโท

Degree Discipline

จุลชีววิทยาทางอุตสาหกรรม

DOI

10.58837/CHULA.THE.1992.575

Abstract

จากการศึกษาตรึงรูปเดกซ์แทรกเนสจากเชื้อ Penicillium sp. สายพันธุ์ 61 โดยมีคาร์บอนกัมมันต์ขนาด 8-16 เมชเป็นตัวพยุง และตรึงรูปแบบเชื่อมด้วยพันธะโควาเลนท์โดยใช้ 3-อะมิโนโพนพิลไทรเอททอกซีไซเลนเป็นสารกระตุ้น และกลูตารัลดีไฮด์เป็นสารสร้างพันธะร่วม พบว่าภาวะที่เหมาะสมต่อการตรึงรูปคือใช้ 3- อะมิโนโพรพิลไทรเอททอกซีไซเลน 2% โดยปริมาตรร่วมกับกลูตารัลดีไฮด์ 2.5% โดยปริมาตร และความเข้มข้นของเดกซ์แทรนเนส 25 หน่วยต่อมิลลิกรัมโปรตีน โดยทำที่อุณหภูมิห้อง ความเป็นกรดด่างที่ 6 และเวลาที่ใช้สำหรับกระบวนการตรึงรูปคือ 3 ชั่วโมงสำหรับการกระตุ้นด้วยสารกระตุ้น 2 ชั่วโมงสำหรับการสร้างพันธะร่วม และ 2 ชั่วโมงสำหรับการตรึงรูปเอนไซม์ ผลของการศึกษาคุณสมบัติของเดกซ์แทรนเนสตรึงรูป พบว่า มีแอคติวิตีจำเพาะสูงขึ้นความเป็นกรดด่างที่เหมาะสมต่อการทำงานของเดกซ์แทรนเนสตรึงรูปเปลี่ยนแปลงจาก pH 5.5 ไปเป็น pH 5.0 อุณหภูมิที่เหมาะสมต่อการทำงานนั้นไม่แตกต่างจากเอนไซม์อิสระ ความเสถียรต่อความเป็นกรดด่าง และต่ออุณหภูมิดีกว่าเอนไซม์อิสระ และยังพบว่าเดกซ์แทรนเนสตรึงรูปนี้มีค่าครึ่งชีวิตมากกว่า 45 วัน เมื่อเก็บในสารละลายฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ความเข้มข้น 0.1 โมลาร์ pH 7 ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส และค่าคงที่ไมคิลิสมีค่าเท่ากับ 9.1ˣ10⁻⁷ โมลาร์สำหรับสับสเตรทเดกซ์แทรน ที-2000 ซึ่งเป็นค่าที่ต่ำกว่าค่าคงที่ไมคิลิสของเอนไซม์อิสระ

Other Abstract (Other language abstract of ETD)

Dextranase from Penicillium sp. Strain 61 has been immobilized on 8-16 mesh activated carbon via covalent binding by the use of 3-aminopyltri-ethoxysilane and glutaraldehyde as activator and intermolecular cross-linker respectively. The optimum conditions for immobilization were: 2 % (v/v) 3-amino-propyltriethoxysilane, 2.5 % (v/v) glutaraldehyde and 25 units/ml of crude dextranase at room temperature, pH 6. Times required for activating, cross-linking and enzyme immobilizing were 3,2 and 2 hours respectively. Characteristics of the immobilized enzyme have been studied and revealed, it was found that the immobilized form possesses higher specific activity, more stable to pH and temperature effects compared to native from while optimum operating pH shifed from 5.5 to 5.0 and optimum temperature remained unchanged. A half-life of over 45 days was obtained when the immobilized enzyme was stored in 0.1 M. phosphate buffer pH 7, 4ºC. Moreover, the apparent Km of the immobilized enzyme toward its substrate, dextran T-2000 was lowered to 9.1x10⁻⁷ M.

Link to Full Text

Share

COinS