Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD)

การแยกและการทำให้บริสุทธิ์ของฮอร์โมน เอชซีจี จากปัสสาวะหญิงมีครรภ์ และการเตรียมแอนติบอดีต่อ เอชซีจี ในกระต่าย

Other Title (Parallel Title in Other Language of ETD)

Separation and purification of HCG hormone from urine of pregnant woman and preparation of rabbit anti-HCG antibody

Year (A.D.)

1993

Document Type

Thesis

First Advisor

นิคม ชัยศิริ

Second Advisor

นลิน นิลอุบล

Third Advisor

ขจีนาฏ โพธิเวชกุล

Faculty/College

Graduate School (บัณฑิตวิทยาลัย)

Degree Name

วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Degree Level

ปริญญาโท

Degree Discipline

เทคโนโลยีชีวภาพ

DOI

10.58837/CHULA.THE.1993.541

Abstract

งานวิจัยได้ปรับปรุงวิธีแยก HCG ออกจากปัสสาวะของสตรีตั้งครรภ์ระยะแรกและทำให้ HCG บริสุทธิ์ โดยนำปัสสาวะมาผ่านเครื่องอัลตร้าฟิลเตรชั่นเพื่อขจัดสารโมเลกุลเล็กและทำให้ HCG เข้มข้นขึ้น จากนั้นนำมาทำให้บริสุทธิ์โดยวิธีโครมาโตรกราฟีแบบใช้ความดันสูง (HPLC) โดยใช้คอลัมน์ PA-DEAE สามารถแยกฮอร์โมนที่มีความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้น 99.5 เท่า และมีแอคติวิตีจำเพาะ 2874.0 IU/ มก. (โปรตีน) ทดสอบความบริสุทธิ์และหาขนาดโมเลกุลด้วยเทคนิคเอสดีเอช โพลีอะคริลาไมด์ เจล อิเลคโตรโฟรีซีส พบว่า HCG ที่ได้ประกอบหน่วยย่อยสองหน่วยมีขนาดโมเลกุล 35,494 และ 38,968 ดาลตัน เมื่อนำ HCG ที่เตรียมได้มาฉีดกระตุ้นให้กระต่ายสร้างแอนติบอดี พบว่ากระต่ายสร้างแอนติบอดี มีค่าไตเตอร์สูงสุด 5 X 105 และไม่พบความแตกต่างของระดับแอนติบอดี เมื่อกระตุ้นด้วย HCG ที่ทีแอคตวิตี 1,000 และ 2,000 IU ได้นำแอนติบอดีมาทำให้บริสุทธิ์ โดยตกตะกอนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟต แล้วตามด้วยโครมาโตกราฟีแบบจำเพาะพบว่ามีความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้น 357 เท่า จากการทดสอบความบริสุทธิ์และหาขนาดโมเลกุลของแอนติบอดีนี้ด้วยเทคนิคเอสดีเอส โพลีอะคริลาไมด์ เจล อิเลคโตรโฟรีซีส พบว่ามีแถบโปรตีน 2 แถบมีน้ำหนักโมเลกุล 46,060 และ 63,580 ดาลตัน เมื่อนำแอนติบอดีที่เตรียมได้มาทดสอบความจำเพาะกับ HOG ที่เตรียมไว้ด้วยวิธีอิมมูโนดิฟฟิวชั่นและอิมมูโนอิเลคโตรโฟริซีส พบว่าเกิดเส้นตะกอน (precipitin line) 1 เส้น ที่คมชัดเจนและเหมือน (identical) กับ HCG มาตรฐาน นอกจากนี้ยังมีเส้นจาง 1 เส้นซึ่งอาจเกิดจาก HCG ที่เปลี่ยนแปลงไป หรือโปรตีนอื่น ๆ ที่ปนมากับ HCG ที่ตรียมได้

Other Abstract (Other language abstract of ETD)

Human Chorionic Gonadotropin from early pregnancy urine was purified to approximately 99.5 folds by HPLC technique using PA-DEAE column after ultrafiltration. The specific activity of HCG determined by ELISA method, was 2,784.0 IU/mg of protein. The purified hormone may comprise 2 subunits with molecular weights of 35,494 and 38,968 daltons as observed by SDS polyacrylamide gel electrophoresis. The purified HCG when immunized to rabbits, gave maximun titer of approximately 5 X 105. There was no difference between immunization with 1,000 IU or 2,000 IU of the hormone. The antisera obtained were pooled and purified to 357 folds by using ammonium sulphate precipitation and affinity chromatography. The purified antibody showed two bands with a molecular weight of 46,060 and 63,580 daltons by SDS polyacrylamide gel electrophoresis. The HCG, however, showed one sharp precipitin line and a faint line when subjected to either immunodiffusion, or immunoelectrophoresis. The faint precipitin line may be due to altered HCG or impurities in the HCG preparation.

Link to Full Text

Share

COinS