Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD)

การทำให้บริสุทธิ์บางส่วนและการตรวจสอบลักษณะสมบัติของไลเปสจาก Pseudomonas aeruginosa

Other Title (Parallel Title in Other Language of ETD)

Partial purification and characterization of lipase from Pseudomonas aeruginosa

Year (A.D.)

1996

Document Type

Thesis

First Advisor

นภา ศิวรังสรรค์

Second Advisor

วิไล อโนมะศิริ

Faculty/College

Graduate School (บัณฑิตวิทยาลัย)

Degree Name

วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Degree Level

ปริญญาโท

Degree Discipline

ชีวเคมี

DOI

10.58837/CHULA.THE.1996.1412

Abstract

Pseudomonas aeruginosa เป็นแบคทีเรียที่แยกได้จากตะกอนในบ่อเลี้ยงกุ้งในประเทศไทยสามารถถูกชักนำให้ผลิตเอนไซม์ไลเปสสูงขึ้นได้โดยเลี้ยงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส pH 7.0 ในอาหารสูตรปรับต่ำที่มี 0.13% (NH₄)₂SO₄ เป็นแหล่งไนโตรเจนและมี 2% ฟรุกโตสเป็นแหล่งคาร์บอน และพบว่าการผลิตไลเปสถูกกดดันในสภาวะที่มีกลูโคสด้วยกระบวนการคาตาบอไลต์รีเพรสชั่น เมื่อทำให้ crude เอนไซม์เข้มข้นขึ้นโดยอุลตราฟิลเตรชั่นและแยกโดย Sephadex G-100 คอลัมน์โครมาโตกราฟีเอนไซม์ไลเปสมีความบริสุทธิ์ขึ้น 10.92 เท่า จากการศึกษาสมบัติของไลเปสที่มีความบริสุทธิ์บางส่วนนี้พบว่าเอนไซม์ประกอบด้วยหน่วยย่อยที่มีน้ำหนักโมเลกุล 63,000 ดาลตัน pH และอุณหภูมิที่เหมาะสมในการเร่งปฎิกิริยาคือ 6.5 และ 35 องศาเซลเซียส แคลเซียมไอออนช่วยกระตุ้นการทำงานของเอนไซม์ การทำงานของเอนไซม์ถูกยับยั้งอย่างสมบูรณ์ด้วยแมงกานีสไอออน แต่ถูกยับยั้งบางส่วนด้วยไอออนของเหล็ก (2+), แมกนิเซียมไอออน, EDTA และ SDS เอนไซม์ไฮโดรไลซ์ได้ทั้งสับสเตรทที่เป็นกรดไขมันสายสั้นและสายยาวโดยน้ำมันมะกอกเป็นสับสเตรทที่ดีที่สุดในสภาวะที่ทำการทดลองโดยค่า Km ต่อน้ำมันมะกอกเท่ากับ 4.09 มก./มล. ที่ 37 องศาเซลเซียส และ pH 7.0 เอนไซม์มีความคงตัวในช่วง pH 6.0-7.5 ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส และมีความคงตัวในช่วงอุณหภูมิ 30-40 องศาเซลเซียส ที่ pH 6.0

Other Abstract (Other language abstract of ETD)

A chemical-defined medium with 0.13% ammonium sulphate as nitrogen source and 2% fructose as carbon source at pH 7.0 and 37℃ were the most suitable culturing condition for the production of extracellular lipase by a local strain of Pseudomonas aeruginosa. Glucose was found to repress on the lipase production through catabolite repression. Lipase from P.aeruginosa was partial purified 10.92 fold by using ultrafiltration and Sephadex G-100 gel chromatography. The partial purified enzyme was complex of subunits with molecular weight of 63,000. The optimum pH and temperature were 6.5 and 35℃, respectively. The enzyme was able to hydrolyse both long chain fatty acyl ester and short chain fattly acyl ester of glycerol. Enzyme activity was activated by calcium ion but was completely inhibited by Mn²⁺ and was partially inhibited by Fe²⁺, EDTA and SDS. The Km for the purified lipase with olive oil was found to be 4.09 mg./ml. at 37℃ and then assayed at pH 6.0 and 37℃, the purified enzyme was found to be stable in the pH rang 6.0-7.5. The purified enzyme was stable over 30-40℃ at pH 6.0.

Link to Full Text

Share

COinS