Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD)

การทำให้บริสุทธิ์บางส่วนและลักษณะสมบัติของโปรติเอส จากป่านศรนารายณ์ Agave sisalana

Other Title (Parallel Title in Other Language of ETD)

Partial purification and characterization of protease from sisal Agave sisalana

Year (A.D.)

1998

Document Type

Thesis

First Advisor

วินิจ ขำวิวรรธน์

Second Advisor

นภา ศิวรังสรรค์

Faculty/College

Graduate School (บัณฑิตวิทยาลัย)

Degree Name

วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Degree Level

ปริญญาโท

Degree Discipline

ชีวเคมี

DOI

10.58837/CHULA.THE.1998.677

Abstract

เมื่อทำโปรติเอสจากป่านศรนารายณ์ Agave sisalana ให้บริสุทธิ์บางส่วนโดยการตกตะกอนด้วยแอมโมเนียมชัลเฟตที่ความเข้มข้นอิ่มตัว 25-80 เปอร์เช็นต์ แล้วนำไปทำโครมาโตกราฟีแบบคอลัมน์ด้วย Sephadex G-100 และ DEAE-cellulose พบว่านีแอคติวิตีจำเพาะ 4.32 ยูนิตต่อมิลลิกรัมโปรตีน มีความบริสุทธิเพิ่มขึ้น 25.41 เท่า และให้ผลผลิตเอนไซม์ 185.65 เปอร์เซ็นต์ เมื่อนำไปทดสอบแอคติวิตีหลังจากทำอิเลกโตโฟริซีลแบบ ไม่เสียสภาพด้วยเคซีน 0.5 เปอร์เซ็นต์ พบแทบแอคติวิตีเพียง 1 แทบ และเมื่อนำไปหาน้ำหนักโมเลกุล โดยวิธีเจลฟิลเตรชันโครมาโตกราฟีโดยใช้คอลัมน์ Sephadex G-100 พบว่าขนาดโมเลกุลของเอนไซม์นี้เท่ากับ 21,800 ดาลตัน pH และ อุณหภูมิที่เหมาะสมในการเร่งปฏิกริยาการย่อยสลายเคซีนของโปรติเอสนี้ คือ pH 7.5 และ 65 °ซ ตามลำดับ และมีความเสถียรที่ pH 8.3 และอุณหภูมิ 20-40°ซ จากการศึกษาด้านจลน์ศาสตร์พบว่าเอนไซม์นี้มีค่า Km ต่อ เคซีน BSA และฮีโมโกลบิน เท่ากับ 0.084, 0.161 และ 0.877 เปอร์เซ็นต์โดยน้ำหนัก ตามลำดับ เอนไซม์นี้ มีความจำเพาะต่อสับสเตรตที่เป็นเปปไทด์สังเคราะห์โดยจำเพาะต่อเปปไทด์ด้านคาร์บอกซิลของลิวซีน Mก2-และ Cd2* สามารถยับยั้งแอคติวิตีของเอนไซม์ได้เช่นเดียวกันกับ HgCI2,p-chloromercuricbenzoate และ lodoacetamide ในขณะที่ Na2S2O5 | diithiothetol และ 2-mercaptoethanol จะกระตุ้นแอคติวิตีของเอนไซม์ ผลข้างต้นนี้ ชี้ให้เห็นว่า โปรติเอสจากป่านศรนารายณ์นี้ควรจะเป็น sulfhydryl protease

Other Abstract (Other language abstract of ETD)

Protease from A. sisalana was partial purified by precipitation by 25-80 % ammoniumsuifete precipitation, Sephadex G-100 column and DEAE -cellulose column chromatography. The purification obtained was 25.41 fold with specific activity of 4.32 Units/mg protein and %yeild of 186.65 %. Activity stain after non- denaturing gel electrophoresis with 0.5% casein as substrate showed a single band The molecular weight of 21,800 was shown with Sephadex G-100 column chromatography. The pH optimum of this enzyme was 7.5 and the temperature optimum was 65 °C, the enzyme was stable at pH 8.3 and 20-40 °C, respectively. The kinetic study of partial purified enzyme showed Km of 0.084, 0.161 and 0.877 % by weight for casein, BSA and hemoglobin respectively. The enzyme also showed specificity towards peptide of G-terminal side of leucine. Mn2-, Cd2+ HgClr p-chloromercuricbenzoate and iodoacetamid could inhibit protease activity while Na2S2O5 | diithiothreitol and 2-mercaptoethanol, activated the enzyme. These results suggested that the enzyme from A. sisalana was sulfhydyl protease

Link to Full Text

Share

COinS