Chulalongkorn University Theses and Dissertations (Chula ETD)

ศึกษาเอนไซม์ metallo-B-lactamase และ integrons ของเชื้อ Pseudomonas aeruginosa ที่ได้จากสิ่งส่งตรวจในประเทศไทย

Other Title (Parallel Title in Other Language of ETD)

Investigation of metallo-B-lactamase producing strains and integrons of pseudomonas aeruginosa clinical isolates in Thailand

Year (A.D.)

2010

Document Type

Thesis

First Advisor

เขมาภรณ์ บุญบำรุง

Second Advisor

รัชนีพร ติยะวิสุทธิ์ศรี

Faculty/College

Faculty of Allied Health Sciences (คณะสหเวชศาสตร์)

Degree Name

วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Degree Level

ปริญญาโท

Degree Discipline

ชีวเคมีคลินิกและอณูทางการแพทย์

DOI

10.58837/CHULA.THE.2010.2035

Abstract

การสร้างเอนไซม์ metallo-β-lactamase (MBL) เป็นสาเหตุหลักที่ทำให้เชื้อ Pseudomonas aeruginosa ดื้อต่อยา carbapenems และยีนที่ควบคุมการสร้างเอนไซม์ชนิดนี้สามารถถ่ายทอดข้ามสายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรียโดยผ่านโครงสร้างทางพันธุกรรมที่เรียกว่า integron ได้ งานวิจัยครั้งนี้จึงมุ่งศึกษาการสร้างเอนไซม์ MBL และความสัมพันธ์ของ class 1 integron ในเชื้อ P. aeruginosa จากสิ่งส่งตรวจ150 ตัวอย่างจากผู้ป่วยในโรงพยาบาลขนาด 1,200 เตียง ในกรุงเทพมหานคร โดยทดสอบความไวและดื้อต่อยาต้านจุลชีพ ด้วยวิธี disc diffusion และหาค่าความเข้มข้นต่ำที่สุดของยา (MIC) imipenem ที่สามารถยับยั้งเชื้อได้โดยใช้ imipenem E-test พบว่า เชื้อมีอัตราการดื้อต่อยาปฏิชีวนะส่วนใหญ่ในอัตราสูง โดยเฉพาะอย่างยิ่ง ยาในกลุ่ม quinolones, กลุ่ม third-generation cephalosporins, กลุ่ม β-lactam/inhibitor และกลุ่ม carbapenems จากนั้นศึกษาเอนไซม์ MBL ในระดับฟีโนไทป์ และระดับโมเลกุล ด้วยวิธี Modified Hodge Test และปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส(PCR) ตามลำดับ และตรวจสอบยีนในกลุ่ม class 1 integron ด้วยวิธี multiplex PCR ผลการทดสอบการสร้างเอนไซม์ MBL พบว่า 28 ตัวอย่าง มีการสร้างเอนไซม์ในระดับ ฟีโนไทป์และเชื้อทุกตัวอย่างในกลุ่มนี้ต่างก็มีค่าMICของยาimipenem สูง(≥32 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร) และในระดับโมเลกุล พบว่า ร้อยละ 33.3 ของกลุ่มตัวอย่าง มียีนในกลุ่ม class 1 integron นอกจากนี้ ยังพบว่าเชื้อมียีน blaIMP และยีน blaVIM จำนวน 28 และ 1 isolate ตามลำดับ ซึ่งเมื่อตรวจสอบลำดับนิวคลีโอไทด์พบว่าเป็นยีนชนิดIMP-14 และVIM-2 ทั้งนี้ คณะผู้วิจัยได้ศึกษาความหลากหลายของสายพันธุ์ของเชื้อโดยใช้วิธี pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) พบว่า เชื้อที่มียีนชนิด IMP-14 เกือบทุกสายพันธุ์มีรูปแถบดีเอ็นเอที่ใกล้เคียงกัน จึงเป็นไปได้ว่า มีการแพร่กระจายของเชื้อสายพันธุ์เดียวกันหรือสายพันธุ์ที่ใกล้เคียงกันระหว่างผู้ป่วย

Other Abstract (Other language abstract of ETD)

Metallo-β-lactamase (MBL) is the major reason for carbapenems resistance in Pseudomonas aeruginosa and the gene encoding of MBL can be transferred to other bacteria via mobile elements; integron. We aimed to investigate MBL- producing P. aeruginosa strains association with class 1 integron observed in 150 isolates from a 1,200-bed hospital of Thailand. First, we investigated their susceptibility profile by the disc diffusion method and also determined the MIC of imipenem using the E-test. They showed a high rate of resistance to most antibiotics especially quinolones, third-generation cephalosporins, β-lactam/inhibitor and carbapenems. The production of MBL was detected in phenotypic and genotypic by the Modified Hodge Test and PCR. Moreover, class 1-integron genes were detected using multiplex PCR. They showed that 28 isolates were phenotypic MBL positive and presented high-level resistant to imipenem (MIC ≥ 32 μg/ml). In genotypic testing, 33.3% appeared to carry class 1-integron genes. 28 isolates harboured the blaIMP gene and 1 isolate harboured the blaVIM gene and revealed IMP-14 and VIM-2 after nucleotide sequencing. Moreover, IMP-14 producing P. aeruginosa isolates were identical and closely related in PFGE pattern, suggesting that the dissemination of these MBL genes could be due to the clonal dissemination.

Link to Full Text

Share

COinS